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实时荧光PCR试剂盒使用注意事项

       实时荧光PCR试剂盒针对的高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。
  样本要求:
  1.适用标本类型:发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。
  2.标本采集,方法如下:
  (1)血清:用一次性注射器取静脉血2-3ml,转至5ml的干燥管中,密闭送检。
  (2)肠内容物:无菌条件下取肠道内容物约1g左右,置入1ml含有1.0mlPBS(或生理盐水)的5ml离心管中,立即送检。
  (3)组织脏器:取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g,置一1.5ml的洁净离心管中,密闭送检。
  3.应避免标本间交叉污染。
  4.标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于2~8℃冷藏保存;如需长期保存,标本应冻存于-80℃以下,避免反复冻融。
  实时荧光PCR试剂盒注意事项:
  1、整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
  2、为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
  3、每次实验应该设置阴、阳性对照。
  4、试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
  5、试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
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