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PCR试剂盒使用前后的注意事项

  PCR试剂盒里分好几部分,最重要的是PCR反应体系:DNA聚合酶,镁离子,引物(测2个基因和1个内标需要3对引物),探针(也要3对探针,发出三种波长的荧光),逆转录酶,dNTP(ATUCG会用部分U代替T),还有用于抗干扰的UDG酶(正常的DNA只有ATCG,PCR扩增出来的DNA会有AT(会用部分U代替T)CG,这样扩增出来的DNA链中有U,UDG酶能切断含U的DNA链,所以扩增DNA在空气中形成的气溶胶,不会影响其他样本)、RNA酶抑制剂(空气中液体里全都是RNA酶,会降解病毒的RNA)、Taq酶的抗体(Hotstart,常温下能抑制Taq酶的活性,PCR扩增时高温让其失活,Taq酶就在高温时恢复活性开始扩增了)。
  PCR试剂盒注意事项
  一、试剂盒使用注意事项
  (1)所有试剂应按照适合温度储存。请勿反复冻融。
  (2)使用后均需要对操作区进行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除剂等。耗材均需使用商品化的无酶耗材。
  二、样本注意事项
  (1)细胞在含/不含血清的环境中均可直接使用试剂盒。
  (2)扩增2kb以内片段,细胞样品浓度不超过1000个细胞。如若扩增片段超过2kb,可适当提高细胞浓度。
  (3)不同组织使用不同的眼科剪和眼科镊进行处理,防止交叉污染导致检测结果偏差。
  三、试剂盒使用过程中注意事项
  (1)PCR过程中推荐使用阴性对照和阳性对照。
  (2)整个过程中使用的吸头、离心管等耗材应丢弃在含有75%乙醇或核酸消除剂的容器中,防止形成环境污染。
  (4)PCR产物3’末端含有A,可直接进行TA克隆。
  四、试剂盒使用后注意事项
  (1)PCR反应完成后,严禁在实验区开盖。应在污染区进行琼脂糖凝胶电泳,防止气溶胶污染。
  (2)为防止试剂盒污染,请勿将不同批号试剂盒混用。
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