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大鼠小梁网细胞操作要点

       大鼠小梁网细胞在房水流动机制中发挥重要作用。在大鼠小梁网细胞中有特定的神经递质和神经肽受体,其中包括肾上腺素,乙酰dan碱和神经肽Y。在小梁细胞中,一长串的血管活性多肽和生长因子能够触发细胞内信号传导机制。小梁网细胞可合成不同类型的细胞外基质蛋白以及金属蛋白酶。公司提供的大鼠小梁网细胞,采用胰mei消化制备而来。细胞的培养采用公司专li产品大鼠小梁网细胞培养试剂盒(RatEyePrimaCell:NormalTrabecularMeshworkCellsCatNo.3-7526)来优化目的细胞生长条件,以降低杂细胞(如脂肪细胞、纤维细胞等)的污染,同时保证质量的稳定。在公司技术部标准的操作流程下,大鼠小梁网细胞传5代仍可以保持原代细胞的分化状态,进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

大鼠小梁网细胞操作要点:

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。

2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。

4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。

5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。

6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。


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